En la Facultad de Ciencias Químico Farmacéuticas y Bioquímicas, la Carrera de Bioquímica viene desarrollando desde mediados de la gestión 2008, la producción y venta de Sangre Desfibrinada de Carnero a diferentes laboratorios clínicos de nosocomios y laboratorios clínicos privados existentes en la ciudad.

Esta actividad se inició gracias a la iniciativa de docentes (Dra. Patricia Poppe, Dra. Myriam Corrales) y autoridades de la Facultad, que motivados por la creciente necesidad de contar con tal insumo en el área de microbiología se embarcaron en el mencionado proyecto. Esta sangre es utilizada en la elaboración de medios de cultivo tales como el Agar Sangre y Agar Chocolate que permiten una buena identificación y diagnóstico de bacterias patógenas para el ser humano mediante su capacidad de producir hemolisis en el mencionado medio de cultivo.

¿Qué es la Sangre Desfibrinada de Carnero?

La Sangre Desfibrinada de Carnero es sangre completa que ha sido procesada, sin uso alguno de aditivos o preservantes para remover la fibrina, factor que estimula la coagulación de la sangre e interfiere con la utilización de la misma en preparación de medios de cultivo.

Características de la Sangre Desfibrinada de Carnero

La sangre desfibrinada está libre de citratos u otros anticoagulantes y libre de agentes complejantes que puedan interferir en el crecimiento y desarrollo microbiano.

La sangre de carnero carece de factores inmunológicos que comúnmente se encuentran en la sangre humana interfiriendo en el diagnóstico, es por esa razón que la sangre de carnero es la más adecuada para la preparación de agar sangre y agar chocolate, generalmente la sangre se utiliza en una proporción del 5 al 10% como un elemento de enriquecimiento nutritivo en la preparación de los medios de cultivo.

El Agar Sangre y Agar Chocolate son utilizados principalmente para el crecimiento e identificación de microorganismos a través de la observación de las reacciones hemolíticas causadas por algunas bacterias de importancia clínica.

Obtención de la Materia Prima

Toda la sangre es recolectada de carneros sanos, libres de enfermedades y que están permanentemente supervisados por profesionales veterinarios controlando su estado nutricional y de salud para garantizar la calidad de la sangre, por tal motivo es que los animales del proyecto están sometidos a una dieta apropiada, controlada y libre de antibióticos.

Los carneros se encuentran en instalaciones de La Barranca dependiente de la Facultad de Agronomía, donde gozan de suficiente espacio para forrajear libremente aunque están separados y aislados del resto del rebaño por motivos de mayor control en la alimentación (afrecho y harina de maíz) y seguridad de los carneros.

Obtención de la Sangre

Los animales son sangrados de manera rotativa cíclica, permitiendo que el animal tenga tiempo para reponer su volumen de células y así evitar que desarrollen anemia, causando así perdida de la calidad de la sangre.

La extracción, procesamiento y envasado de la sangre se hace bajo estrictas condiciones de asepsia, así mismo se realiza un riguroso control de calidad de esterilidad de la sangre en agar nutritivo, agar sangre, y BHI durante 72 horas.

Desfibrinación

La desfibrinación se realiza en envases de vidrio estéril que contienen perlas de vidrio también estériles, allí se coloca la sangre que ha sido obtenida bajo normas de esterilidad, para luego ser sometida a agitación por un tiempo determinado, lo que permite separar las redes de fibrina formadas del resto de la sangre.

Este es un punto muy importante en el proceso de producción de la sangre, la agitación debe realizarse con sumo cuidado para no hemolizar la sangre, es decir para no destruir los glóbulos rojos y así disminuir el valor nutricional de la sangre para el medio de cultivo, es así que lo ideal es realizar la agitación de la sangre mediante un agitador eléctrico para erlenmeyers o Agitador de Placas o de manera manual.

Culminada la agitación se somete a la sangre a un proceso de filtración para separar la fibrina y las perlas de vidrio del resto de la sangre.

Envasado de la Sangre Desfibrinada

El producto final es entregado en un envase estéril de vidrio conteniendo 10.5 ml de sangre, con la fecha de procesamiento y número de lote. La Sangre se debe conservar en refrigerador entre 4 – 6 oC hasta su empleo y se debe atemperar la sangre antes de su uso en los medios de cultivo. La sangre se entrega en tubos de vidrio de borosilicato con tapa rosca previamente esterilizados por medio del autoclave esto garantiza la esterilidad de la sangre dotada a los diferentes laboratorios.

Control Microbiológico

Una vez repartida la sangre en los diferentes tubos, se procede a sembrar un poco de la sangre remanente en cada frasco en el que se filtró el producto desfibrinado, en medios de cultivo como BHI y Agar Sangre para control microbiológico. Se incuban los medios por 48 horas para controlar que no haya sucedido contaminación de la sangre durante su procesamiento, al cabo de ese tiempo y sin desarrollo bacteriano en los medios, se procede a la entrega de la sangre a los diferentes laboratorios. De observar desarrollo microbiano en los medios de cultivo, se procede a identificar el germen por medio de una Tinción de Gram y un set de pruebas Bioquímicas. Una vez identificado el germen, la sangre se desecha ya que en esas condiciones de contaminación microbiana no tiene utilidad en el laboratorio.

Satisfactoriamente, estas situaciones de contaminación de la sangre durante su procesamiento ya han sido dejadas atrás hace mucho tiempo, gracias al trabajo coordinado entre todos los miembros del Equipo de Producción de Sangre Desfibrinada de Carnero (Docentes – y Administrativos) y al estricto control de los coordinadores del proyecto en la esterilización y manejo del material empleado durante el proceso de desfibrinación.

Es un medio de cultivo enriquecido que se usa para la investigación de los diversos tipos de hemolisis (Alfa, Beta o Gamma). Se utiliza para el crecimiento y aislamiento de estreptococos.

Para la preparación del Agar Sangre se puede emplear agar nutritivo enriquecido con cloruro de sodio tripticasa de soya. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes, pero si puede añadir factores inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper lo eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras que son termolábiles.

La sangre utilizada como aditivo a estos medios de cultivo suele ser de carnero diluida al 5%; en algunas ocasiones se puede utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo) pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. Tal es el caso de la sangre de carnero que no posee anticuerpos ni reacciones del complemento en contra de las bacterias que pueden ser patógenas para el ser humano y causantes de enfermedad.

Agar Chocolate
El agar chocolate se obtiene calentando la sangre una vez adicionada al medio de cultivo base por un tiempo de 15 minutos en baño maría. El agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio de cultivo un importante elemento para el crecimiento: Factor X o hemina termoestable y el Factor V o NAD.

El agar chocolate es un medio de cultivo destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes; el agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios mas enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidos en la sangre, estas mezclas, denominadas de manera diferente de acuerdo a la casa fabricante (polivitex, isovitalex y otras) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias.

Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos, un ejemplo clásico es el medio de cultivo Thayer Martin, utilizado para el aislamiento de gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora microbiana acompañante.